微量凱氏定氮法的測定調整分析

凱氏定氮法測定蛋白質含量具有一定的準確度，在物質蛋白含量的測定中運用比較廣泛。但凱氏定氮法也存在著一些不足之處，如消化時間長、環境汙染大、滴定終點不易控製等。鑒於(yu) 此，在傳(chuan) 統凱氏定氮法的基礎上，對試驗裝置如和操作方法進行一些改進，可以大大提高測定蛋白質的效率，並且降低了測定過程中對空氣的汙染。

凱氏定氮法的原理如下：總共包括四個(ge) 步驟消化、蒸餾、吸收和滴定。首先消化過程為(wei) 將含氮化合物和濃硫酸共熱，將有機氮轉化為(wei) 無機氮硫酸銨，具體(ti) 方程式為(wei) 2NH2+H2S04+2H＝（NH4）2S04（其中CuSO4做催化劑）。之後就是蒸餾和吸收，將消化完的樣品轉移到蒸餾裝置，加入過量的濃氫氧化鈉，將NH4+轉變成NH3，通過蒸餾把NH3驅入過量的硼酸溶液接受瓶內(nei) ，硼酸接受氨後，形成四硼酸銨。此過程用公式表示為(wei) （NH4）2SO4+2NaOH＝2NH3+2H2O+Na2SO4 　　2NH3+4H3BO3＝（NH4）2B4O7+5H2O。 zui後一步驟為(wei) 滴定，用標準鹽酸滴定，直到硼酸溶液恢複原來的氫離子濃度。此時反應式為(wei) （NH4）2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3。這樣，整個(ge) 凱氏定氮法的過程，就通過這幾個(ge) 方程式，全部體(ti) 現出來了。

而對於(yu) 凱氏定氮法的改進，主要體(ti) 現在：1.消化裝置的組裝：將原微量凱氏定氮法需要固定的凱氏燒瓶換成不需要固定的250mL的錐形瓶，同時在瓶口倒置一漏鬥，漏鬥頸頂部用玻璃彎管連接，彎管再用導管與(yu) 內(nei) 盛稀堿溶液的大燒杯相連。2.消化過程：將樣品放入錐形瓶中，然後加入濃硫酸，當裝置安裝完畢後，放在通風櫥中，打開電爐，對燒瓶直接加熱，進行消化。起初用小火並隨時調節火的大小，使產(chan) 生的煙氣被堿液*吸收；待內(nei) 容物全部炭化，泡沫*停止後加強火力，隨時轉動燒瓶，使瓶壁上的內(nei) 容物全部回流入消化液中，燒至溶液透明，沉澱灰白，取下待冷。3.測定過程：在100mL錐形瓶內(nei) 加入15mL體(ti) 積分數為(wei) 1%硼酸吸收液，置於(yu) 冷凝器下，並使管口浸入硼酸內(nei) ，夾緊放氣口，取10mL樣品稀釋液或空白液由進樣口注入反應室。以5mL蒸餾水衝(chong) 洗樣口，用量筒量取5mL質量分數25%NaOH，迅速倒入進樣口，並立即塞好，加水於(yu) 進樣口，以防氨逸出，從(cong) 第1滴溜液滴下開始計時，蒸餾3min，移動吸收瓶，使硼酸液麵離開冷凝管口，再蒸餾1min，然後用少量蒸餾水衝(chong) 洗冷凝管下端，從(cong) 而保證了遊離氨被*蒸餾接收。此時我們(men) 要確定氨氣*被吸收記錄下消耗的酸的體(ti) 積。此時繼續夾緊排氣口，提起進口塞，使蒸餾水流入反應室，捏緊進氣橡皮管，以斷絕蒸汽源。這時反應室中的廢液被自動吸出，如此反複衝(chong) 洗幹淨反應室，將排氣閥打開，使反應室外層中的廢液排出。

對於(yu) 凱氏定氮法進行改進後，能提高定氮的效率，同時減少汙染，而且操作更加簡單。另外，其測定結果跟用測出來的結果幾乎沒有差別。因此，我們(men) 在測定蛋白質含量或者氮元素含量的時候，需要慎重選擇測定方法，以提高其測定結果度以及測定效率。