飼料黴菌檢驗方法標準

標準類別：GB-國家標準，關(guan) 鍵詞：飼料黴菌檢驗方法，標準號：GB13092-91，標準名稱：飼料中黴菌檢驗方法，標準分類：農(nong) 業(ye) 飼料標準。

      1 主題內(nei) 容與(yu) 適用範圍
      本標準規定了飼料中黴菌的檢驗方法。
      本標準適用於(yu) 飼料中黴菌的檢驗。
      2 原理
      根據黴菌生理特性，選擇適宜於(yu) 黴菌生長而不適宜於(yu) 細菌生長的培養(yang) 基，采用平皿計數方法，測定黴菌數。
      3 設備及材料
      3.1 天平；感量1g，zui大秤量1000g。
      3.2 顯微鏡：1500×。
      3.3 溫箱：25-28±1℃ 。
      3.4 冰箱：普通冰箱。
      3.5 高壓滅菌器：2.5kg。
      3.6 幹燥箱：50-250±1℃。
      3.7 水浴鍋：45-77±1℃。
      3.8 振蕩器：往複式。
      3.9 微型混合器；2900r/min。
      3.10 電爐。
      3.11 酒精燈。
      3.12 接種棒：鎳鉻絲(si) 。
      3.13 溫度計：100+1℃。
      3.14 載玻片。
      3.15 蓋玻片。
      3.16 乳缽。
      3.17 試管架。
      3.18 玻璃三角瓶：250，500mL。
      3.19 試管：15×150mm。
      3.20 平皿：直徑9cm。
      3.21 吸管：1，10mL。
      3.22 玻珠：直徑5mm。
      3.23 廣口瓶：100，500mL。
      3.24 金屬勺、刀等。
      3.25 橡皮乳頭。
      4 培養(yang) 基和稀釋液
      4.1 高鹽察氏培養(yang) 基。
      4.2 稀釋液。
      4.3 試驗室常用消毒藥品。
      5 檢驗程序
      黴菌檢驗程序如下：
      檢樣
      |
      --------------------------
      ↓ ↓ ↓
      磨碎←--塊狀飼料 穀物飼料 粉狀飼料
      | 原料 |
      | ↓ |
      --→ 加無菌稀釋液10倍稀釋振蕩30min ←--
      ↓
      做成幾個(ge) 當倍數的稀釋液
      ↓
      選擇3個(ge) 適當稀釋度、各以1ml加入滅菌平皿內(nei)
      ↓
      每皿加入適量高鹽察氏培養(yang) 基
      ↓
      25-28±1℃培養(yang) 1周
      ↓
      菌落計數
      ↓
      報告
      6 操作步驟
      6.1 采樣
      采樣時必須特別注意樣品的代表性和避免采樣時的汙染。首先準備好滅菌容器和采樣工具，如滅菌牛皮紙袋或廣口瓶，金屬勺和刀，在衛生學調查基礎上，采取有代表性的樣品，樣品采集後應盡快檢驗，否則應將樣品放在低溫幹燥處。
      根據飼料倉(cang) 庫、飼料垛的大小和類型，分層定點采樣，一般可分三層五點或分層隨機采樣，不同點的樣品，充分混合後，取500g左右送檢，小量存貯的飼料可使用金屬小勺采取上、中、下各部位的樣品混合。
      海運進口飼料采樣：每一船倉(cang) 采取表層、上層、中層及下層四個(ge) 樣品，每層從(cong) 五點取樣混合，如船倉(cang) 盛飼料超過10000t，則應加采一個(ge) 樣品。必要時采取有疑問的樣品送檢。
      6.2 以無菌操作稱取樣品25g（或25mL），放入含有225mL滅菌稀釋液的玻塞三角瓶中，置振蕩器上，振搖30min，即為(wei) 1∶10的稀釋液。
      6.3
      用滅菌吸管吸取1∶10稀釋液10mL，注入帶玻璃珠的試管中，置微型混合器上混合3min，或注入試管中，另用帶橡皮乳頭的1mL滅菌吸管反複吹吸50次，使黴菌孢子分散開。
      6.4 取1mL1 10稀釋液，注入含有 9mL滅菌稀釋液試管中，另換一支吸管吹吸5次，此液為(wei) 1100稀釋液。
      6.5 按上述操作順序作10倍遞增稀釋液，每稀釋一次，換用一支
      1mL滅菌吸管，根據對樣品汙染情況的估計，選擇三個(ge) 合適稀釋度，分別在作10倍稀釋的同時，吸取
      1mL。稀釋液於(yu) 滅菌平皿中，每個(ge) 稀釋度作兩(liang) 個(ge) 平皿，然後將涼至45℃左右的高鹽察氏培養(yang) 基注入平皿中，充分混合，待瓊脂凝固後，倒臂於(yu) 25-28±l
      溫箱中，培養(yang) 3d後開始觀察，應培養(yang) 觀察一周。
      6.6 計算方法
      通常選擇菌落數在30-100個(ge) 之間的平皿進行計數，同稀釋度的2個(ge) 平皿的菌落平均數乘以稀釋倍數，即為(wei) 每克（或每毫升）檢樣中所含黴菌數。
      6.7 報告
      每克（或每毫升）飼料中含黴菌數以個(ge) /g（個(ge) /mL）表示。
      附 錄 A
      培養(yang) 基和稀釋液製備
      （補充件）
      除特殊規定外，本標準所用化學試劑為(wei) 分析純或化學純；生物製劑為(wei) 細菌培養(yang) 用；水為(wei) 蒸餾水。
      A1 高鹽察氏培養(yang) 基
      A1.1成分
      硝酸鈉（GB636）
      磷酸二氫鉀（GB1274） 1g
      硫酸鎂（MgSO4·7H20，GB671） 0.5g
      氯化鉀（GB646） 0.5g
      硫酸亞(ya) 鐵（GB664） 0.01g
      氯化鈉（GB1266） 60g
      蔗糖（HG3—1001） 30g
      瓊脂 20g
      蒸餾水 1000mL
      A1.2製法
      加熱溶解，分裝後，115 高壓滅菌 30min。必要時，可酌量增加瓊脂。
      A2 稀釋液
      A2.1成分
      氯化鈉（GB1266） 8.5g
      蒸餾水 1000mL
      A2.2製法
      加熱溶解，分裝後，121 高壓滅菌30min。