蛋白質含量測定方法

蛋白質含量測定方法一般來說，有以下五種：凱氏定氮法，雙縮尿法（Biuret法）、Folin－酚試劑法（Lowry法）、紫外吸收法和考馬斯亮藍法（Bradford法）。

表五種蛋白質含量測定方法的比較

方法	靈敏度	時間	原理	幹擾物質	說明
凱氏定氮法 （Kjedahl法）	靈敏度低，適用於(yu) 0.2~ 1.0mg氮，誤差為(wei) ±2％	費時 8～10小時	將蛋白氮轉化為(wei) 氨，用酸吸收後滴定	非蛋白氮（可用三氯乙酸沉澱蛋白質而分離）	用於(yu) 標準蛋白質含量的準確測定；幹擾少；費時太長
雙縮脲法（Biuret法）	靈敏度低 1～20mg	中速 20~30分鍾	多肽鍵＋堿性Cu2＋®紫色絡合物	硫酸銨； Tris緩衝(chong) 液； 某些氨基酸	用於(yu) 快速測定，但不太靈敏；不同蛋白質顯色相似
紫外吸收法	較為(wei) 靈敏 50～100mg	快速 5～10分鍾	蛋白質中的酪氨酸和色氨酸殘基在280nm處的光吸收	各種嘌吟和嘧啶； 各種核苷酸	用於(yu) 層析柱流出液的檢測；核酸的吸收可以校正
Folin－酚試劑法（Lowry法）	靈敏度高 ～5mg	慢速 40～60 分鍾	雙縮脲反應；磷鉬酸－磷鎢酸試劑被Tyr和Phe還原	硫酸銨； Tris緩衝(chong) 液； 甘氨酸； 各種硫醇	耗費時間長；操作要嚴(yan) 格計時； 顏色深淺隨不同蛋白質變化
考馬斯亮藍法（Bradford法）	靈敏度zui高 1～5mg	快速 5～15分鍾	考馬斯亮藍染料與(yu) 蛋白質結合時，其lmax由465nm變為(wei) 595nm	強堿性緩衝(chong) 液； TritonX-100; SDS	的方法； 幹擾物質少； 顏色穩定； 顏色深淺隨不同蛋白質變化

      從(cong) 以上表格中可以得出，不同的方法有不同的特點和優(you) 勢，如紫外吸收法測定時間快。但是綜合起來，zui後一種考馬斯亮藍法（Bradford法）效率zui高，無論是測定時間，靈敏度還是受幹擾程度，都是比較占優(you) 勢的。

    下麵，我們(men) 來重點介紹一下其中一種蛋白質含量測定方法--凱氏定氮法。

凱氏定氮法（Kjedahl法）

首先將濃硫酸倒入樣品中，邊倒邊搖晃，以使濃硫酸與(yu) 樣品充分接觸，然後加熱試劑。如果你需要加快實驗進度，可以加入CuSO4作催化劑，這樣，實驗的反應時間就會(hui) 大大縮短。CH₂COOH和H₂SO₄反應生成氨氣，然後氨氣又與(yu) H₂SO₄發生作用，固定了氮元素。這時我們(men) 得到了（NH₄）₂SO₄的溶液，然後我們(men) 可以用NaOH去跟硫酸銨反應，通過計算NaOH的使用量，就可以計算出氮的含量。下麵是整個(ge) 定氮法中發生的化學反應。

    CH₂COOH+ 3H₂SO₄ = 2CO₂ + 3SO₂ +4H₂O +NH₃    （1）

    2NH₃ + H₂SO₄= （NH₄）₂SO₄                       （2）

    （NH₄）₂SO₄ + 2NaOH =2H₂O +Na₂SO₄ + 2NH₃        （3）

       當我們(men) 得到氮的含量以後，我們(men) 就可以通過一定的計算，zui終算出蛋白質的含量。

       凱氏定氮法常用於(yu) 有機化合物中的氮含量的測定，是蛋白質含量測定的經典方法，雖然在測試過程中，試劑用量很大，但是，不可否認，它所適用的樣品範圍之廣，測試結果之，都是*的。

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